ชุดตรวจหาไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ (2019-nCoV) (ฟลูออเรสเซนต์ RT-PCR)

【วัตถุประสงค์การใช้งาน】

ชุดเครื่องมือนี้เป็น PCR ฟลูออเรสเซนต์ตามเวลาจริงของโพรบ TaqMan เพื่อตรวจหา ORF1ab, กรดนิวคลีอิกของยีน N ของ 2019-nCoV ในเชิงคุณภาพ, เสมหะในผู้ป่วยที่สงสัยว่ามีอาการของโรคปอดอักเสบ และผู้ป่วยที่มีอาการคลัสเตอร์

ผลการทดสอบมีไว้สำหรับการอ้างอิงทางคลินิกเท่านั้น และไม่สามารถถือเป็นเกณฑ์มาตรฐานสำหรับการวินิจฉัยทางคลินิกเท่านั้น ขอแนะนำให้ทำการวิเคราะห์โดยเปิดเผยเกี่ยวกับอาการทางคลินิกและผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการอื่นๆ

ผู้ปฏิบัติงานควรมีประสบการณ์ในการฝึกอบรมวิชาชีพด้านการขยายยีนหรือการทดสอบวิธีการทางอณูชีววิทยา และมีคุณสมบัติที่เกี่ยวข้องกับการปฏิบัติงานในห้องปฏิบัติการ ห้องปฏิบัติการควรมีข้อควรระวังด้านความปลอดภัยทางชีวภาพและขั้นตอนการป้องกันที่เหมาะสม

【หลักการทดสอบ】

ในชุดเครื่องมือนี้ ไพรเมอร์และโพรบได้รับการออกแบบสำหรับภูมิภาคอนุรักษ์และเฉพาะของ ORF1ab, N ของ 2019-nCoV ตามลำดับ Fluorescent PCR ใช้เพื่อตรวจหา RNA ของไวรัสหลังจากการทำให้บริสุทธิ์ด้วยกรดนิวคลีอิกของ RNA ตัวอย่าง

ชุดทดสอบนี้ใช้เทคโนโลยี PCR เรืองแสงตามเวลาจริง ในระหว่างการขยาย PCR โพรบจะผูกกับแม่แบบ และกลุ่มนักข่าว 5'-end ของโพรบจะถูกแยกโดยเอนไซม์ Taq (5'→3' กิจกรรม exonuclease) ด้วยเหตุนี้ เคลื่อนออกจากกลุ่มดับเพื่อสร้างสัญญาณเรืองแสง เส้นโค้งการขยายตามเวลาจริงได้รับการลงจุดโดยอัตโนมัติตามสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ที่ตรวจพบ และค่า Ct ของตัวอย่างจะถูกคำนวณ (จำนวนรอบที่พบเมื่อสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ในแต่ละหลอดปฏิกิริยาถึงเกณฑ์ที่กำหนด) FAM , VIC และ Texas red fluorophores ถูกนำมาใช้เพื่อทำเครื่องหมายยีน ORF1ab , โพรบของยีน N ในสารละลายปฏิกิริยา เมื่อใช้การทดสอบเพียงครั้งเดียว การตรวจหายีน 2019-nCoV สองยีนข้างต้นในเชิงคุณภาพสามารถดำเนินการพร้อมกันได้

เพื่อหลีกเลี่ยงผลลบลวง ชุดอุปกรณ์มีการควบคุมภายใน (IC) ซึ่งทำเครื่องหมายด้วยกลุ่มเรืองแสง Cy5 ซึ่งสามารถใช้ตรวจสอบขั้นตอนการสกัดและสารละลายปฏิกิริยาได้

【ส่วนประกอบหลัก】

หมายเหตุ¹ : ไม่สามารถแลกเปลี่ยนส่วนประกอบล็อตที่แตกต่างกันได้

หมายเหตุ² : ชุดทดสอบไม่มีสารรีเอเจนต์สกัดกรดนิวคลีอิก โปรดเตรียมรีเอเจนต์ก่อนใช้งาน

1. การจัดการตัวอย่าง

เพิ่มการควบคุมภายใน 10μL เข้าไปในการควบคุมเชิงบวกและการควบคุมเชิงลบ 200μL ตามลำดับเพื่อดำเนินการสกัดกรดนิวคลีอิก

2. การเตรียมน้ำยา:

การเตรียมระบบ: ใช้เครื่องเพิ่มความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิกที่ติดตั้งไว้ล่วงหน้า ตามมาด้วยการเปิดถุงฟอยล์และหมุนเหวี่ยงทันที จำนวนตัวอย่างของการทดสอบแต่ละครั้งควรเป็นจำนวนทวีคูณของ 8 โดยมีกลุ่มควบคุมเชิงบวกหนึ่งกลุ่มและกลุ่มควบคุมเชิงลบหนึ่งกลุ่ม เติมน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส 35μL ลงบนหลอดปฏิกิริยาแต่ละหลอด

3.โหลดตัวอย่าง:

เติมกรดนิวคลีอิกตัวอย่าง 5μL ที่จะทดสอบ การควบคุมเชิงบวก การควบคุมเชิงลบที่ปริมาตรของปฏิกิริยาทั้งหมดคือ 40 μLในสารละลายปฏิกิริยาที่จัดสรร เนื่องจากไม่จำเป็นต้องใช้ส่วนผสมละเอียด และเพียงแค่ปิดฝาของหลอดปฏิกิริยา PCR ปั่นแยก ของเหลวในผนังท่อที่ด้านล่างของท่อ จึงดำเนินการขยาย PCR

หลังจากการตรวจสอบแล้ว คาดว่าการเติมน้ำมันพาราฟิน 5μL-10μL ในระบบ PCR จะไม่ส่งผลกระทบต่อผล PCR แต่จะหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนและการกลายเป็นไอของของเหลว